俄罗斯专享会284专注于提供细胞体外基因敲除解决方案，特别针对细胞基因敲除的定制服务。迄今为止，我们已推出多项细分的敲除服务，欢迎与俄罗斯专享会284团队咨询，获取详细的技术路线及成功案例资料。

定制基因敲除服务

我们提供真核细胞体外基因敲除的定制服务，特别针对这一服务，俄罗斯专享会284团队将定期更新常见问题解答（Q&A），以更好地服务客户。

常见问题解答（Q&A）

以下为Q&A【2503版】的前20个问题，涉及基因敲除定制服务的相关问题，欢迎详细了解：

• 服务指南| 俄罗斯专享会284高通量基因敲除定制服务（RNP法）
• 如何验证基因敲除是否成功？
• 精准敲除和模糊敲除如何区别？

精准敲除与模糊敲除

(1) 精准敲除：利用同源重组机制（HDR）进行基因编辑，在目标基因中精准引入特定的修饰（如片段删除、点突变或插入），以实现基因功能的部分或完全失活。此策略通常与传统的基因敲除范畴不同。俄罗斯专享会284提供专业的精准敲除服务，包括对靶基因特定区域的核苷酸序列进行敲除、敲入及突变等操作。

(2) 模糊敲除：通过非同源末端连接（NHEJ）机制，在目标基因特定区域随机引入插入或缺失突变，导致基因编码框移位或提前终止，从而影响基因功能。

CRISPR/Cas9技术

23. CRISPR/Cas9方法能敲除的最大片段范围大约有多少？理论上可以刺毁1kb-1Mb范围的片段，结合多靶点切割技术或其他技术（如CRISPRa/i、表观遗传修饰），能实现超大片段的敲除（1Mb）。

24. 如何提高原代细胞的编辑效率？可通过以下几种方式实现：使用病毒载体（慢病毒/AAV整合至基因组）、电场诱导细胞膜穿孔、采用脂质纳米颗粒包裹Cas9-sgRNA复合物，并直接将Cas9-RNP导入细胞核等。

敲除效率与分析

25. 如何提高基因敲除效率？

26. 如何分析基因敲除后的表型变化？

27. 如何区分纯合敲除与杂合敲除？

28. CRISPR RNP法适用的细胞及场景有哪些？

结语

CRISPR/Cas9 RNP基因编辑法是通过将多条对应目标基因的sgRNA与Cas9蛋白在体外混合形成的核糖核蛋白复合物（RNP），并利用电转或脂质体转染的方式，将RNP快速引入细胞内，进而高效实现目标基因的敲除，形成稳定的细胞池，而中间无需传统的慢病毒或质粒转染和筛选过程。由于RNP在细胞内可在72小时内完成基因组编辑并随即降解，因此对细胞表型影响甚微，成为目前脱靶效应最低的方式。本技术有效规避了传统方法中可能出现的基因组不稳定性及高脱靶风险，俄罗斯专享会284正致力于推动CRISPR/Cas9 RNP法的广泛应用，以全面取代传统的基因敲除方式。