实验背景
小胶质细胞在大脑中担任重要的免疫细胞角色，负责碎片吞噬、神经元支持和突触修剪等关键功能，并与阿尔兹海默病（AD）等神经系统疾病的发生密切相关。不同亚群的小胶质细胞在神经系统微环境中各有其职能。虽然荧光显微镜可以帮助区分其表型，但存在耗时较长、通量低和主观性强等局限性。单细胞测序虽然可以进行高维分析，但其高成本和数据分析技术的门槛限制了其普及。为此，来自美国俄克拉荷马大学健康科学中心的研究人员使用Cytek® Aurora™全光谱分析型流式细胞仪，开发了一套高通量、简便易用的完整解决方案，以实现小胶质细胞的精细化分型。该方案不仅可以扩展更多标志物，还能应用于不同组织和疾病类型，并能与全光谱分选型流式细胞仪无缝对接，便于分选目标细胞并进行下游功能性实验。

细胞预处理
研究人员首先制备单细胞悬液，通过配置组织消化酶进行处理。该过程包括将特定的酶混合物与组织样本结合，在适宜的程序下处理组织，随后离心去除上清液并进行细胞悬浮。通过在系统中采用特定的操作步骤，细胞能够有效分离，并为后续的染色和检测做好准备。

细胞染色
样本经过离心后，将细胞重悬于染色缓冲液中，并添加Fc受体阻断剂以防止非特异性结合。随后，按照实验设计添加对应的抗体进行染色和处理。通过精确控制每个实验步骤，确保细胞在理想状态下进行标记，为后续数据采集提供可靠基础。

样本采集及数据分析
使用拥有五激光配置的Cytek® Aurora™全光谱流式细胞仪进行样本的采集和数据分析。需要特别注意的是，由于小鼠大脑组织存在较高的自发荧光，数据分析时必须从软件中选择提取此类荧光的功能。研究中采用FSC/SSC参数排除碎片，并通过经典指标如CD11b+CD45Mid识别小胶质细胞。

小胶质细胞细分
基于标志物的表达情况，此研究将小胶质细胞细分为四个群体：稳态小胶质细胞、疾病相关小胶质细胞（DAM）、干扰素反应性小胶质细胞（IRM）以及脂滴聚集的小胶质细胞（LDAM）。这种细分不仅有助于深入理解小胶质细胞的功能，也为探索其在神经系统疾病特别是阿尔兹海默症中的角色奠定了基础。

研究结果
最新的研究显示，不同年龄和性别的小鼠海马体中小胶质细胞的丰度存在显著差异，特别是年老雌性小鼠中的疾病相关小胶质细胞比例显著升高。这一现象可能解释了在阿尔兹海默症等神经性疾病中性别对疾病易感性和进展的影响。通过深入分析这些差异，研究人员为理解神经炎症的机制和发展有效的治疗策略提供了重要的生物医学依据。

参考文献
1. Cox, J.E. et al. Flow Cytometry Analysis of Microglial Phenotypes in the Murine Brain During Aging and Disease. BioProtoc 14, e5018, doi:10.21769/BioProtoc.5018 (2024).
2. Ocañas, S.R. et al. Microglial senescence contributes to female-biased neuroinflammation in the aging mouse hippocampus: implications for Alzheimer's disease. Journal of Neuroinflammation 20, 188, doi:10.1186/s12974-023-02870-2 (2023).

俄罗斯专享会284 的研究为未来小胶质细胞相关疾病的研究和疗法开发提供了新思路。此方案的推广与应用将推动生物医学领域的进步，特别是在神经系统疾病的检测与治疗方面。