俄罗斯专享会284的人肺腺癌细胞NCI-H1975培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：NCI-H1975人肺腺癌细胞

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10% FBS

传代方法：第一次建议采用1:2比例进行传代

传代情况：每2天更换培养基

备注：使用无菌离心管收集管中培养基，留作过渡培养。

二、收到细胞后的处理

细胞收到后，应立即培养至良好状态，然后灌满完全培养液并封好瓶口。这是运输细胞的最佳方式。在收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶以进行消毒，随后将其放置于超净工作台内严格进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后进行后续处理。显微镜下观察细胞生长情况并拍摄不同倍数的照片保存（建议40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片则默认其状态良好。注意在放入培养箱时，密封培养瓶的盖子应拧松。传代后，建议使用原瓶的完全培养基和自配的完全培养基进行对比培养。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

如细胞未达到80%的汇合度，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基在37℃、5% CO2孵箱中培养。如细胞密度超过80%，请按照以下步骤进行传代：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放入37℃培养箱中消化1-2分钟后，利用显微镜观察细胞变化，若细胞大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻轻敲打培养瓶后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落并吸出，随后将悬液转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶（两个T25瓶），补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，然后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆时加入5ml完全培养基以终止消化，再轻轻吹打细胞使其脱落，随后转移至15ml离心管中并以1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀的细胞加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
4. 将冻存的细胞直接放入-80℃冰箱中，若需转移至液氮罐，需在-80℃冰箱存放24小时以上。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护设备），快速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞重悬于5ml完全培养基中，然后接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2培养箱中继续培养。
4. 第二天，替换为新鲜完全培养基以继续培养。

四、注意事项

个别细胞特性，如贴壁不牢，可能在运输过程中发生脱落，这是正常现象。请将所有培养液收集至离心管，并以1000RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养（之后进行对比培养）。沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基以终止反应。再次离心，弃上清，加入1-2ml完全培养基变成重悬液，然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

五、售后条款

俄罗斯专享会284提供的售后服务包括：

1. 细胞出现问题时，可以重发的情况包括：运输过程中的细胞丢失、瓶身破损或培养液严重漏液等，需在收到后48小时内报告并提供真实的实验结果。
2. 如出现污染，需在收到后48小时内提供相关实验结果以核实，方可重发。
3. 若常温发货的细胞静置24小时后，或干冰冻存发货的细胞在复苏后24小时内绝大多数细胞未存活（需提供真实清晰的状态照片），均可申请重发。
4. 针对细胞活性问题，请在收到产品7天内提供真实的实验结果，采用台盼蓝染色法评定活力，核实后可重发。
5. 照片记录：收到当天及第2、3天需拍照保存，若三天内未告知问题，则视为产品合格。

请注意，细胞出现问题时，某些情况不予重发，例如：由于客户操作不当、造成污染或使用非推荐的培养体系导致细胞状态不佳等。具体情况将按需评估。