大鼠成纤维样滑膜细胞FLS培养指导
一、细胞培养条件
细胞名称：大鼠成纤维样滑膜细胞FLS
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM + 10% FBS + 1% 双抗
传代方法：第一次建议1:2传代，并在传代后2天更换培养基。
备注：使用无菌离心管收集培养基，建议进行对比培养。如果对比效果不佳，建议直接购买我们的俄罗斯专享会284完全培养基。
二、细胞到货后的处理
收到细胞后，待细胞状态良好后，注入完全培养液并封闭瓶口为最佳运输方式。收到细胞后，用75%酒精消毒整瓶细胞，置于超净台内进行严格无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱静置3-4小时以稳定细胞状态后再进行后续处理。建议用显微镜观察细胞生长情况，并分别拍摄不同倍数（40x, 100x, 200x）的照片保存。前三天的照片为重要售后依据，如未提供照片则默认状态良好。
三、细胞培养步骤
a、细胞传代
1. 如果细胞汇合度未超过80%，将瓶中的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO2孵箱中培养。
2. 若细胞密度超过80%，可进行传代，步骤如下：
- 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
- 添加0.25%胰蛋白酶约1-2ml至培养瓶中，在37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞大部分变圆并脱落，及时轻敲培养瓶，加入5ml以上的完全培养基终止消化。
- 轻轻吹打使细胞脱落后吸出，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
- 将细胞悬液按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中培养。
b、细胞冻存
1. 当细胞覆盖T25培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1ml，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基，终止消化，并轻轻吹打使细胞脱落，然后转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞放入-80℃冰箱存放，如需转入液氮罐，需在-80℃存放24小时以上。
c、细胞复苏
1. 从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴解冻，直至无结晶后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重悬细胞于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。
四、注意事项
有些细胞贴壁较弱，运输中可能出现脱落情况，这是正常的。如脱落严重，可以将培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养，加入胰酶处理细胞，再进行分瓶传代，最终补充新鲜完全培养基。
五、售后条款
- 细胞运输过程中如遭遇丢失、瓶身破损、严重漏液等，予以重发。
- 细胞污染问题需在收到后48小时内提供实验结果，核实后重发。
- 细胞复苏后24小时内存活情况不佳者，须提供真实的细胞状态照片，重发。
- 因客户造成的细胞污染，不重发。
- 客户操作不当导致细胞状态不良，不重发。
- 细胞状态不良未提供前三天照片的，不重发。
如在培养过程中遇到任何问题，可随时与我们联系，确保您的细胞研究顺利进行，尽享俄罗斯专享会284品牌带来的高品质服务。
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