细胞复苏后状态不佳,该如何调整?针对细胞复苏后状态差的问题,我们可以分析其原因并采取相应的解决措施。
1. 细胞冻存不当
解决方法:尝试调整细胞状态,例如增加血清比例,并在后续传代中继续优化。
2. 自行制备的冻存细胞无活性
解决方法:在制备冻存细胞时,选用传代次数少且处于对数期的细胞。提高冻存密度有助于提升复苏存活率,推荐的密度为100~300万细胞/mL。
3. 细胞复苏方法不当
解决方法:复苏时应注意“快融”,越快融化,细胞所受损伤越小。确保冷冻细胞迅速解冻,接种前用预热的生长培养基缓慢稀释细胞。
4. 复苏培养基使用不当
解决方法:确保培养基在使用前已预热,并尽快移除包含冷冻保护剂的培养基,以防止细胞活力下降。
5. 处理细胞时动作不够轻柔
解决方法:冻存和复苏过程对大多数细胞都会造成不利影响。应避免通过涡旋振荡或猛烈敲打培养瓶的方法来使细胞脱落(除非是在培养昆虫细胞时),也不要进行高速离心。
6. 细胞稀释过度
解决方法:高密度接种解冻后的细胞,以改善复苏效果。
7. 冻存液中所用保护剂未避光储存
解决方法:如果冻存保护剂未避光储存,可能会转变为对细胞有毒的物质。建议重新取一只冻存保护剂,重新冻存细胞。
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