### 检测原理

2DLuminescentCellViabilityAssay利用ATP依赖的荧光素酶催化荧光素发光反应，通过化学发光信号来测定细胞内部ATP含量，进而评估细胞活性或定量活细胞数量。该方法具有检测线性范围宽、灵敏度高、稳定性好的优点。在96孔板中，100至100,000个细胞范围内表现出良好的线性关系，但不同细胞的检测数量上限会有所不同。操作简便，试剂盒中的试剂为即用型，读数稳定、检测速度快，完成检测仅需约10分钟，无需清洗细胞或更换培养液。与其他常见细胞活力测定方法如Calcein-AT和CCK-8相比，2DLuminescentCellViabilityAssay显得更为简单快捷。

### 产品优势

2DLuminescentCellViabilityAssay（abs50065）具有高灵敏度和宽线性范围，能够兼容少量样品检测及大量样品的高通量筛选。其优势如下：

1. 方便快速：试剂盒中的检测试剂即用型，稳定，检测速度快，约10分钟即可完成检测；
2. 灵敏度高：能够检测到最低10nmol的ATP；
3. 线性范围宽：在96孔板中，100到100,000个细胞范围内有良好的线性关系，不同细胞的上限检测数量可能不同；
4. 高通量：可兼容少量样品测定及大量样品的高通量筛选。

### 使用方法

#### 一、试剂准备

在实验前一天，将试剂取出置于4℃过夜融化。也可选择在实验当天以室温融化，或置于22℃水浴中，但温度不应超过25℃。为了平衡至室温，若试剂在非室温条件下融化，使用前可在22℃水浴中轻微加热。一般情况下，5mL包装需要约10分钟，50mL包装需要约20分钟。使用前轻柔颠倒5次以确保溶液均匀。

接着，吸取所需体积的试剂，加入适量的TritonX-100，使其终浓度为0.2%。内含的液体即为检测工作液（例如8mL ATP检测试剂加0.2mL TritonX-100）。

#### 二、检测步骤

1. 细胞培养：使用适合化学发光检测的96孔板，每孔接种100μL细胞（依据培养时间决定初始密度，且每孔细胞数量应不超过10万个），并设置不含细胞的培养液孔作为阴性对照。细胞在37℃、5% CO2条件下培养。在适当时间进行药物处理。
2. （可选）ATP标准曲线的制作：将制备的ATP标准溶液用PBS稀释成适当的浓度梯度，每孔加入100μL标准品。
3. 细胞活力检测：
   1. 融解冻存的检测试剂，平衡至室温，并按需添加TritonX-100。
   2. 取出细胞培养板，平衡至室温约10分钟。
   3. 每孔加入100μL的检测试剂。
   4. 室温振荡2分钟以促进细胞裂解。
   5. 静置10分钟以使发光信号稳定。
   6. 使用多功能酶标仪进行化学发光检测，设置合适的参数，一般检测时间为0.25-1秒。
   7. 根据化学发光读数计算细胞相对活力，或借助ATP标准曲线计算ATP含量。

### 注意事项

1. 温度：试剂含有荧光素酶，反复冻融会影响其活性，建议分装并在-20℃避光保存。试剂和细胞样品需在使用前平衡至室温。
2. 化学因素：荧光素酶的反应速率和发光强度受化学环境影响，建议设置包含药物的细胞培养液对照孔。
3. 光敏感：本试剂对光敏感，需避免光照以延长发光强度的稳定性。
4. ATP污染：操作时要佩戴口罩和乳胶手套，避免接触可能被污染的表面。

本次讲解到此结束，如有细胞实验相关问题，欢迎交流！

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