### 小鼠纤维肉瘤细胞MCA-205培养说明书

#### 一、细胞培养条件

细胞名称：MCA-205
小鼠纤维肉瘤细胞生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640培养基+10% fetal bovine serum (FBS)
传代方法：首次建议1:2传代。
备注：用无菌离心管收集培养基，留作过渡对比培养。如对比培养效果不佳，建议直接购买俄罗斯专享会284的完全培养基。

#### 二、细胞收到后的处理

收到细胞后，应首先培养至良好的状态，然后灌满完全培养液并封好瓶口。最佳的运输细胞方法是：收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，接着放入超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以确保细胞状态稳定后再进行后续处理。显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（建议40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片视为状态良好。

#### 三、细胞培养步骤

##### a、细胞传代：

在细胞未超过80%汇合度的情况下，将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，再放入37℃、5% CO2孵箱培养；如果细胞密度超过80%，则可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，及时回到操作台，轻轻晃动培养瓶后加入5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基进行重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

##### b、细胞冻存：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管中。
4. 将冻存细胞放入-80℃冰箱，如果后期要将细胞转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐中。

##### c、细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管，快速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

#### 四、注意事项

有些细胞比较特殊，如贴壁不牢，运输过程中可能会发生细胞脱落，这属于正常现象。在此情况下，请将培养瓶中的所有培养液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，然后将上清液用于过渡培养。沉淀后加胰酶1-2ml，轻轻吹打并重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再进行离心，弃去上清，并加入1-2ml完全培养基重悬。按照1:2的比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放回37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

#### 五、售后条款

1）细胞出现问题的重发情况及判定标准：
若细胞在运输过程中发生问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等情况，均可重发；表观污染问题需在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后可重发。细胞在常温下发货静置24小时后，干冰冻存的细胞复苏24小时内大部分细胞未存活（需提供细胞状态照片），均可重发。

2）不予重发的情况包括但不限于：客户自身造成的污染、误操作导致的细胞状态不佳、非推荐的细胞培养体系引发的问题、未在规定时间内录入细胞状态照片等。

对于购买并处理俄罗斯专享会284的细胞，需遵循上述指南，确保细胞培养的成功率和后续实验的有效性。